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細(xì)胞簡介：

Cajal間質(zhì)細(xì)胞以網(wǎng)絡(luò)狀分布在消化道腸神經(jīng)系統(tǒng)末梢與平滑肌細(xì)胞之間的一類特殊細(xì)胞。胃腸道運(yùn)動(dòng)功能的產(chǎn)生和維持是Cajal間質(zhì)細(xì)胞、腸神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌細(xì)胞三者協(xié)同作用的結(jié)果。間質(zhì)細(xì)胞不僅能自發(fā)產(chǎn)生節(jié)律性慢波，而且能介導(dǎo)腸神經(jīng)系統(tǒng)與平滑肌間的信號調(diào)節(jié)。

細(xì)胞特性：

1）  組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腸組織。

2)  細(xì)胞鑒定：c-kit熒光染色為陽性。

3)  經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)  不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)  細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代間質(zhì) 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人精加壓素（AVP）elisa檢測試劑盒

獼猴骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)elisa檢測試劑盒

電鏡樣品固著液（2％Formalin 固著液）

小鼠結(jié)締組織生長因子（CTGF）elisa檢測試劑盒

大鼠層連蛋白/板層素(LN)elisa檢測試劑盒

組織中總磷酸鹽測試盒

大鼠(trypsin)elisa檢測試劑盒

尿素待測樣品處理試劑盒

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)elisa檢測試劑盒

F-box蛋白相關(guān)蛋白33抗體 FBXO33

FITC標(biāo)記人CD81單克隆抗體 human CD81/FITC

磷酸肌醇磷酸酶蛋白INPP5H抗體 Synaptojanin 2

卵泡抑素相關(guān)蛋白1抗體 FSTL1

蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞基1c抗體 PPP1R1C

電壓門控鉀通道Kv8.2抗體 KCNV2

鋅指蛋白ZZZ3抗體 ZZZ3

溴化丙胺太林相關(guān)蛋白2抗體 STOML2

R3H卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 R3HCC1

RAS相關(guān)抑細(xì)胞生長蛋白1抗體 DIRAS1

絲/蘇蛋白磷酸酶PGAM5抗體 PGAM5

四磷酸鳥苷水解酶抗體 HDDC3

肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體 ALS2CR4

脊髓性肌癥蛋白SMA抗體 Gemin 2

17號染色體開放閱讀框59抗體 C17orf59

5-溴脫氧核苷（增殖標(biāo)志物）單克隆抗體 BrdU(Proliferation Marker)

組蛋白H3-K122（mono）甲基化檢測試劑盒

大鼠α1抗前體(pre-α1-AT)elisa分析檢測試劑盒

pre-α1-AT ELISA Kit

人過氧化氫酶(CAT)elisa分析檢測試劑盒

大鼠腸間質(zhì)細(xì)胞CATELISAkit

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。