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細(xì)胞簡介：

兔脂肪分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲(chǔ)存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色（棕色）脂肪細(xì)胞，常呈白色，在嬰幼兒期大量增殖，到青春期數(shù)量達(dá)到，此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡，稱為脂質(zhì)泡，富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外，還有一種褐色脂肪細(xì)胞，在動(dòng)物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部、腋窩、縱隔及腎臟周圍，含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪，作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱，調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔脂肪采用膠原酶-聯(lián)合消化法獲得前脂肪細(xì)胞，經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔脂肪經(jīng)油紅O染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形、圓形

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔脂肪體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠ADM2(ADM2)檢測試劑盒 ，英文名： ADM2 ELISA Kit

Mouse bone specific alkaline phosphatase B (ALP-B) ELISA Kit 小鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)檢測試劑盒

MouseEmbryonicStemMESPU30,M30ELISAKit 小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumahrombomodulin,TMELISAKit人血栓調(diào)節(jié)蛋白

通用型羊關(guān)節(jié)腦病毒(AhritisEncephalitisVirus)試劑盒20次

ELISAKitHSP-40大鼠熱休克蛋白40

TGFB1重組小鼠 Latent TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 Protein

6(KLK6)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 6 (KLK6)

BCL2L11重組人 BCL2L11 / Bim 蛋白 Protein

GLA Protein Human 重組人 alpha-Galactosidase A / GLA 蛋白

IL21 Protein Canine 重組狗 IL21 / Interleukin 21 蛋白

6(KLK6)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 6 (KLK6)

GLA Protein Human 重組人 alpha-Galactosidase A / GLA 蛋白

TGFB1重組小鼠 Latent TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 Protein

IL21 Protein Canine 重組狗 IL21 / Interleukin 21 蛋白

BCL2L11重組人 BCL2L11 / Bim 蛋白 Protein

小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Explicit peptide (extein) ELISA Kit 人外顯肽(extein)檢測試劑盒

HumanskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit 人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCardiacmyosin-lightchains1,CMLC-1檢測試劑盒人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

煮沸法質(zhì)粒/柯斯質(zhì)粒DNA快速抽提試劑盒20次

humansolubleclusterofdiffereiation28,sCD28ELISAKit人可溶性CD28(sCD28)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔脂肪細(xì)胞兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。