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細(xì)胞簡介：

兔淋巴結(jié)淋巴分離自淋巴結(jié)；淋巴結(jié)是哺乳類的周圍淋巴器官，由淋巴細(xì)胞集合而成。呈豆形，位于淋巴管行進(jìn)途中，是產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要器官之一。淋巴結(jié)表面包有被膜，被膜的結(jié)締組織伸入淋巴結(jié)內(nèi)形成小梁，構(gòu)成淋巴結(jié)的支架。被膜下為皮質(zhì)區(qū)，淋巴結(jié)的中心及門部為髓質(zhì)區(qū)。皮質(zhì)區(qū)有淋巴小結(jié)、彌散淋巴組織和皮質(zhì)淋巴竇（簡稱皮竇），髓質(zhì)包括由致密淋巴組織構(gòu)成的髓索和髓質(zhì)淋巴竇（簡稱髓竇）。淋巴竇的竇腔內(nèi)有許多淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，從輸入淋巴管流來的淋巴液先進(jìn)入皮竇再流向髓竇，后經(jīng)輸出淋巴管離開淋巴結(jié)。淋巴結(jié)的主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。淋巴結(jié)腫大或疼痛常表示其屬區(qū)范圍內(nèi)的器官有炎癥或其他病變。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)；當(dāng)局部感染時(shí)，細(xì)菌、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞是白細(xì)胞的一種，由次級淋巴器官淋巴結(jié)產(chǎn)生，是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分；細(xì)胞為圓形細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)少。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔淋巴結(jié)淋巴采用分離淋巴結(jié)組織、研磨獲取單細(xì)胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為1×106cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔淋巴結(jié)淋巴經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不增殖；不傳代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔淋巴結(jié)淋巴體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠L選擇素(SELL)檢測試劑盒 ，英文名： SELL ELISA Kit

Mouse ai IgE receptor aibody ELISA Kit 小鼠抗IgE受體抗體檢測試劑盒

Mouseα-GlucosidaseELISAKit 小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanmyelinbasicprotein,MBPELISAKit人髓0脂堿性蛋白

同戊二酸脫氫酶(αketoglaratedehydrogenase)20單位

ELISAKitsCD30L大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體

ACVR2B重組食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 蛋白 Protein

IL-16(Interleukin-16 0.5mgIL-16(Interleukin-16) 白介素16抗原

TFRC重組人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

HBP1 Protein Human 重組人 HBP1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

ERBB2 Protein Mouse 重組小鼠 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL-16(Interleukin-16 0.5mgIL-16(Interleukin-16) 白介素16抗原

HBP1 Protein Human 重組人 HBP1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

ACVR2B重組食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 蛋白 Protein

ERBB2 Protein Mouse 重組小鼠 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TFRC重組人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 大鼠胎盤生長因子(PLGF)檢測試劑盒

HumanC-PeptideELISAKit 人C肽(C-Peptide)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanclusterOfdiffereiation,CD4檢測試劑盒人CD4分子(CD4)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白脫乙?；?span>11(HDAC11)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Humaheumatoidfactor,RFELISAKit人類風(fēng)濕因子(RF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞兔素(Renin)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔神經(jīng)生長因子（NGF）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔色素上皮衍生因子(PEDF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔熱休克蛋白90(HSP-90)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。