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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔肝實質(zhì)分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實質(zhì)細胞是指具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝實質(zhì)細胞與主要病生理變化：急性肝炎、肝硬化、肝膿腫。肝實質(zhì)細胞屬于中高度分化細胞，生長營養(yǎng)需求高，在體外存活時間短；細胞呈圓形或多角形，核大而圓，居中，常染色質(zhì)豐富，部分有雙核或多倍體核。肝臟作為體內(nèi)重要的器官，在整個物質(zhì)代謝過程中具有廣泛而多樣的作用。

方法簡介：

實驗室分離的兔肝實質(zhì)采用混合酶灌流消化、反復低速離心制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔肝實質(zhì)經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1代，不建議傳代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔肝實質(zhì)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠熱休克蛋白試劑盒   小鼠熱休克蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠熱休克蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠熱休克蛋白試劑盒、小鼠熱休克蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠熱休克蛋白9試劑盒   小鼠熱休克蛋白9試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠熱休克蛋白9試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠熱休克蛋白9試劑盒、小鼠熱休克蛋白9試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒、小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒、小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit G(IgG)試劑盒

HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 人銅藍蛋白(CP/CER)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Equinemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELA試劑盒馬主要組織相容性復合體(MHC/ELA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑20次

Mousecoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Kruppel樣因子4(KLF4)重組蛋白 Recombinant Kruppel Like Factor 4, Gut (KLF4)

RNASE1重組人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 Protein

CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白

GPT2 Protein Rat 重組大鼠 GPT2 蛋白

阿黑皮素原(POMC)重組蛋白 Recombinant Proopiomelanocortin (POMC)

CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白

DDR1重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

AIF1重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 Protein

兔肝實質(zhì)細胞大鼠膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)試劑盒 ，英文名： ANXA5 ELISA Kit

Mouse ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 小鼠原激活肽(TAP)試劑盒

Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 大鼠黑色素細胞抗體(MCAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGGT(Humangammaglamylanspeptidase)ELISAKit人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶

細胞甘油-3-0酸脫氫酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量試劑盒20次

RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒規(guī)格：96T/48T