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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人子宮內(nèi)膜上皮分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。子宮內(nèi)膜即黏膜，由上皮（屬單層柱狀上皮，有分泌細胞和纖毛細胞二種）和固有膜（由結(jié)締組織構(gòu)成，其內(nèi)有大量的星形細胞，稱為基質(zhì)細胞）組成，子宮內(nèi)膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層，功能層較厚，約占內(nèi)膜厚度的4/5；基底層較薄較致密，約占1/5，功能層可剝脫，而基底層不可剝脫。子宮內(nèi)膜上皮細胞主要功能：①子宮內(nèi)膜亦稱子宮黏膜，是指構(gòu)成哺乳類子宮內(nèi)壁的一層；②子宮內(nèi)膜對動情素和孕激素都起反應，因此可隨著性周期（發(fā)情周期、月經(jīng)周期）發(fā)生顯著的變化。子宮內(nèi)膜與胚胎附植密切相關(guān)，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎與母體“對話"的過程中，子宮內(nèi)膜上皮細胞充當了極其重要的角色。子宮內(nèi)膜構(gòu)成雌性哺乳動物子宮壁的內(nèi)層，位于子宮腔面，在動物生殖生理活動中占有重要地位。子宮和子宮內(nèi)膜是維持雌性動物生理功能和生育能力的重要器官，子宮內(nèi)膜的再生修復是子宮的重要生理功能。體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的人子宮內(nèi)膜上皮采用膠原酶消化法，結(jié)合上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人子宮內(nèi)膜上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人真胰島素(TI)ELISA 試劑盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)檢測試劑盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH檢測試劑盒人免疫反應性生長激素(irGH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量檢測試劑盒20次(10樣本)

HumanleukocyteaigenA，HLA-AELISAKit人類白細胞抗原A(HLA-A)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

豚鼠白介素8(IL-8)檢測試劑盒 ，英文名： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)檢測試劑盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β內(nèi)啡肽受體

細菌血液瓊脂平板50個

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔熱休克蛋白20(HSP-20)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人子宮內(nèi)膜上皮細胞人脂蛋白a檢測試劑盒   人脂蛋白a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋白a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白a試劑盒、人脂蛋白a 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂阿拉伯甘露聚糖檢測試劑盒   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒、人脂阿拉伯甘露聚糖檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人正常T細胞表達和分泌因子檢測試劑盒   人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒、人正常T細胞表達和分泌因子檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人整合素連接激酶1檢測試劑盒   人整合素連接激酶1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人整合素連接激酶1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人整合素連接激酶1試劑盒、人整合素連接激酶1 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。