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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維分離自關(guān)節(jié)韌帶組織；韌帶是纖維結(jié)締組織，將各個(gè)骨頭在關(guān)節(jié)處連接起來(lái)，并在關(guān)節(jié)活動(dòng)時(shí)加固關(guān)節(jié)穩(wěn)定關(guān)節(jié)。其中顳下頜關(guān)節(jié)、踝關(guān) 節(jié)、膝關(guān)節(jié)韌帶組織研究較多，顳下頜關(guān)節(jié)兩側(cè)各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關(guān)節(jié)周圍韌帶根據(jù)其解剖位置可以分成3組，外側(cè)韌帶 ，內(nèi)側(cè)三角韌帶，脛腓聯(lián)合韌帶。膝關(guān)節(jié)的韌帶有囊外韌帶和囊內(nèi)韌帶,其共同作用為加強(qiáng)關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關(guān)節(jié)囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續(xù),向下附著于脛骨粗隆，兩側(cè)有側(cè)副韌帶加強(qiáng)；囊內(nèi)韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側(cè)髁的內(nèi)側(cè)面 ，防止脛骨過(guò)度前移;后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內(nèi)側(cè)髁的外側(cè)面，防止脛骨過(guò)度后移。另外，在膝關(guān)節(jié)內(nèi)尚有膝橫韌帶。任何關(guān)節(jié)韌帶均可由于 外傷而發(fā)生損傷，但影響較大又較常見(jiàn)的是膝關(guān)節(jié)韌帶損傷和踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。膝關(guān)節(jié)韌帶損傷，常見(jiàn)者為膝關(guān)節(jié)側(cè)副韌帶損傷。多因膝關(guān)節(jié)微屈時(shí)，突然受到 內(nèi)翻或外翻的沖擊力所致。踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。多因行走或跑跳時(shí)誤入不平之處所致。以外側(cè)損傷多見(jiàn)。韌帶是致密纖維結(jié)締組織，主要特點(diǎn)是細(xì)胞、基質(zhì)成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強(qiáng)的保護(hù)和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細(xì)胞。人關(guān)節(jié)韌帶成纖維對(duì)研究關(guān)節(jié)韌帶損傷有重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒

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HumanBcellreceptor,BCRELISAKit 人B細(xì)胞受體(BCR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenNuclearfactor-kappaB,NF-κB檢測(cè)試劑盒雞核因子κB(NF-κB)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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CSF2RB Protein Rat 重組大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

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小鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human keratan sulfate (KS) ELISA Kit 人角質(zhì)素(KS)檢測(cè)試劑盒

Humannonmethylatedoligonucleotide,NONELISAKit 人非甲基化寡核苷酸(NON)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickensecretoryimmunoglobulinA,SIgA檢測(cè)試劑盒雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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MouseFibronectin,FNELISAKit小鼠纖連蛋白(FN)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞小鼠脫酶(ID)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠褪黑素(MT/MLT)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質(zhì)酸(HA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。