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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人骨骼肌成纖維分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人骨骼肌成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人骨骼肌成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LIF ELISA Kit

Opioid receptor in mouse beta (beta -EPR) ELISA Kit 小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠(mouse Fibrinogen)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIrna(HumanImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核酸

通用型動(dòng)物細(xì)胞周期(G1/S和G2/M期)同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次

ELISAKitTNF-β大鼠腫瘤壞死因子β

C2重組人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

抗增生抗體靶分子1(TAPA1)重組蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)

NTF3重組人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein

CEACAM5 Protein Human 重組人 CEACAM5 / CD66e 蛋白

HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

抗增生抗體靶分子1(TAPA1)重組蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)

CEACAM5 Protein Human 重組人 CEACAM5 / CD66e 蛋白

C2重組人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

NTF3重組人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein

小鼠晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat caspase 9 (Casp-9) ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)檢測(cè)試劑盒

HumanProteinSELISAKit 人蛋白S(ProteinS)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG檢測(cè)試劑盒雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞P21蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

Mousefreefattyacids,FFAELISAKit小鼠游離脂肪酸(FFA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人骨骼肌成纖維細(xì)胞小鼠3(VD3)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠2(VD2)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠(VD)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠C(VC)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。