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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠嗅球分離自嗅球組織；嗅球是脊椎動物前腦結(jié)構(gòu)中參與嗅覺的部分，用于感知氣味。嗅球分為二個不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。在大腦額葉來自許多嗅細胞的神經(jīng)纖維纏集在一起，形成線球狀的部分。在這里，纖維與多個次級神經(jīng)元——僧帽細胞的樹突相連接，進而由這里伸出神經(jīng)纖維形成嗅囊，終止于額葉下方。一般認為它在嗅味的辨別中具有重要的功能。對于大部份的脊椎動物而言，嗅球位在大腦的前面，不過人的嗅球位于大腦的內(nèi)部。嗅球由篩骨的篩板固定且保護嗅球，哺乳動物的篩板會分隔嗅球和嗅上皮，而嗅神經(jīng)會穿過篩板中的篩孔而連接到嗅球。嗅球分為二個不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠嗅球采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠嗅球經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2天半量換液1次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 不傳代，不增值，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠心型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP3)檢測試劑盒 ，英文名： FABP3 ELISA Kit

Pla vitamin A (VA) ELISA Kit 植物A(VA)檢測試劑盒

Mouseplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit 小鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanai-Ku-aibodyELISAKit人抗Ku抗體

細胞FY激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitACTH大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯(lián)受體30抗原

SLC3A2重組人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

CD68 Protein Human 重組人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 標簽)

AGO2 Protein Mouse 重組小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯(lián)受體30抗原

CD68 Protein Human 重組人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 標簽)

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

AGO2 Protein Mouse 重組小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

SLC3A2重組人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

小鼠雄激素(androgen)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)檢測試劑盒

Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 人葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenAcetoaceticacid,ACAC檢測試劑盒雞乙酰乙酸檢測(ACAC)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

雜交清洗液500毫升

MouseHyaluronicacid,HAELISAKit小鼠透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠嗅球細胞小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清總補體(CH50)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清(NO)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝