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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠骨髓來(lái)源巨噬分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞較易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長(zhǎng)期生存。巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來(lái)源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞，在脊椎動(dòng)物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫)。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來(lái)源巨噬采用分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來(lái)源巨噬經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 巨噬細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 （12mM）

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

方法簡(jiǎn)介：

培養(yǎng)信息：

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠抑制素βE(INHβE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： INHβE ELISA Kit

Mouse immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白E(IgE)檢測(cè)試劑盒

MouseOncostatin-M,OSMELISAKIT 小鼠抑瘤素M(OSM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumandysophinELISAKit人肌養(yǎng)蛋白

細(xì)胞5-焦0酸甲戊二羥酸脫羧酶(mevalonate5-pyrophosphatedecarboxylase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitCsA大鼠A

CPB1重組小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 Protein

CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha 0.5mgCaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原

TP63重組人 P63 / TP63 / Tumor protein p63 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

F9 Protein Human 重組人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白

SLAMF1 Protein Rat 重組大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 蛋白

CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha 0.5mgCaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原

F9 Protein Human 重組人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白

CPB1重組小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 Protein

SLAMF1 Protein Rat 重組大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 蛋白

TP63重組人 P63 / TP63 / Tumor protein p63 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)檢測(cè)試劑盒

humahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-nucleolusaibody,ANA檢測(cè)試劑盒人抗核仁抗體(ANA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物糖類總量鐵比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

humanUDP-glucoseceramideglucosylansferaseELISAKit人尿苷二0酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞小鼠β干擾素檢測(cè)試劑盒   小鼠β干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠β干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β干擾素試劑盒、小鼠β干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠α羥基脫氫酶檢測(cè)試劑盒   小鼠α羥基脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠α羥基脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α羥基脫氫酶試劑盒、小鼠α羥基脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠α葡萄糖苷酶檢測(cè)試劑盒   小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒、小鼠α葡萄糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠α干擾素檢測(cè)試劑盒   小鼠α干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠α干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α干擾素試劑盒、小鼠α干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。