產品名稱：線粒體分離提取試劑盒（細胞樣品）
產品特點：線粒體分離提取試劑盒（細胞樣品）的相關產品：C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)重組蛋白 Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)FABP1 Protein Human 重組人 L-FABP / FABP1 蛋白
產品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：1296
線粒體分離提取試劑盒（細胞樣品）的詳細資料：
產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產品英文名稱：Mitochondrion Extraction Kit (Cultured Cells)
產品中文名稱：線粒體分離提取試劑盒（細胞樣品）
規(guī)格：50 T/200 T
貨號：EY-01X8553
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• 無需1小時，即可從2x10*7細胞中提取完整的線粒體。
• 使用基于試劑的方法能夠同時處理多個樣品，或使用Dounce均質化方法獲得盡可能高的產率。
• 分離的線粒體幾乎與任何下游應用兼容。
保存建議:請參閱說明書中各個組分的存儲條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定12個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
線粒體是一種雙膜結合的細胞器，存在于大多數(shù)真核細胞中。線粒體的功能是提供細胞能量。此外，線粒體參與其他任務，如信號傳遞、細胞分化和細胞死亡，以及維持對細胞周期和細胞生長的控制。線粒體與多種人類疾病有牽連，包括線粒體疾病、心臟疾病、心力衰竭和孤癥。線粒體可能在這些細胞過程中發(fā)揮重要作用。
本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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