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產(chǎn)品名稱：節(jié)狀古柏線蟲(chóng)LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn)：節(jié)狀古柏線蟲(chóng)LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品：Flumequine 氟甲喹 42835-25-6 100mg細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 100T 盒2,4-D 2,4-二苯氧 10g 瓶Chloral hydrate 水合醛 100g 瓶微生物培養(yǎng) Saponin 茶皂素 25g 瓶Aflatoxin G1 黃曲G1 1165-39-5 20mgAll
產(chǎn)品型號(hào)：50次
更新日期：2021-02-07
訪問(wèn)次數(shù)：648
50次節(jié)狀古柏線蟲(chóng)LAMP試劑盒的詳細(xì)資料：
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱 | 節(jié)狀古柏線蟲(chóng)LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Bursaphelenchus nodosus |
規(guī)格 | 50次 |
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Flumequine 氟甲喹 42835-25-6 100mg
細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 100T 盒
2,4-D 2,4-二苯氧 10g 瓶
Chloral hydrate 水合醛 100g 瓶
微生物培養(yǎng)
Saponin 茶皂素 25g 瓶
Aflatoxin G1 黃曲G1 1165-39-5 20mg
Allomatrine 641-39-4 20mg
D-Fructose D-果糖 500g 瓶
Olaquindox 喹乙醇 25g 瓶
2%TTC染色液 500ml 瓶
Brassinolide 24-表油菜素內(nèi)酯 100mg 瓶
節(jié)狀古柏線蟲(chóng)LAMP試劑盒小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
大鼠 RBM41 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 PIANP / C12ORF53 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 HNRNPM 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 TLR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
人 TIMP-1 / TIMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 HSP90AA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 SAV1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 RND1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 B3GNT2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
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